Veteriner Hekimlikte Araştırma Dergisi / Journal of Research in Veterinary Medicine

Permanent URI for this communityhttps://hdl.handle.net/11452/5067

Browse

Browsing by Subject "3β-HSD"

Filter results by typing the first few letters
Now showing 1 - 1 of 1
  • Thumbnail Image
    Item
    Plasental steroidogeneziste kilit enzim: 3β-hidroksisteroid dehidrogenaz/∆5-4 izomeraz (3β-hsd)’ın ökaryon vektörde klonlanmış prob’larla belirlenmesi
    (Uludağ Üniversitesi, 2010-06-24) Schuler, Gerhard; Özalp, Gözde; Uludağ Üniversitesi/Veteriner Fakültesi.
    3β-hidroksisteroid dehidrogenaz/∆5-4 izomeraz (3β-HSD) plasental steroidogenesiz’de kilit enzim olarak kabul edilir. Steroid hormonların oluşumu için, pregnenolon ∆5 ve ∆4 sentez yollarında kullanılan 3βhidroksisteroid dehidrogenaz/∆5-4 izomeraz (3β-HSD)’a ihtiyaç duyar. Çalışmanın amacı, hedef genin, bir ökaryon vektor üzerinde klonlanmasıyla prob elde edilmesi ve in situ hibridizasyonda kullanılabilirliğinin gösterilmesidir. Bu amaçla total RNA izolasyonundan sonra RT-PCR yapıldı. DNA bantları agaroz jelden ayrılarak saflaştırıldı. 3βHSD-DNA’ların E.coli suşuna transformasyonu tamamlandıktan sonra 3βHSD insert içeren vektörden NcoI ve NotI restriksiyon enzimleriyle kesildi. DIG-işaretli cRNA’ların transkripsiyonu sonrasında in situ hibridizasyon yapıldı. Spesifik boyanmalar tek nukleuslu trofoblast hücrelerinde gözlenirken negatif kontrol grubunda boyanma gözlenmedi. Sonuç olarak bir ökaryon vector üzerinde, hedef gen klonlanarak steroidogenik enzimlerin belirlenmesinde kullanılmak üzere, in situ hibridizasyon tekniği için oldukça spesifik prob’lar elde edilmiştir.